尹世刚

说到抗体，学生物的小伙伴再熟悉不过啦，选择的抗体是否合适、抗体的质量优劣都关乎实验的成败。下面将从高品质抗体的选择、验证数据对抗体的重要性及内参抗体的选择标准等方面给大家一些建议。 1 质量是甄选优质抗体的首要标准 市面上常见的抗体有进口品牌、国产品牌、进口品牌国内分装这几种类型。大部分进口品牌在抗体的质量、特异性、效价及保存条件方面较有保障。而有些国产品牌的抗体，在做Western Blot时，…

内参抗体种类很多，比如β-actin、β-tubunlin、GAPDH、Lamin B等，那么针对自己的实验，我们该如何选择呢?下面简单介绍下选择内参抗体应遵循的原则： 一.样本种属来源： 首先要考虑的就是实验样本来源于什么物种。 1、哺乳动物的组织或者细胞样本，通常选择β-actin、β-tubulin、GAPDH、Lamin B、Histone H3、Na,Katpase等。 2、植物来源实验…

蛋白免疫印迹（western blotting）一般由凝胶电泳、样品的印迹和免疫学检测3个部分组成，是根据抗原抗体特异性结合检测样本中某种蛋白的方法，与ELISA不同的地方在于WB是一种半定量的检测方法。操作流程如下： 下面详细介绍一下每个操作步骤：   一、样本的制备   （1）样本一般是组织和细胞，根据样本类型的不同，选择合适的裂解液： 样本类型 裂解液 全细胞 NP-40、RIPA 细胞质（…

上次跟大家分享了一个做WB的小技巧如何做出简简单单的WB背景？今天我们来接着分享。 刚开始做WB遇到很多问题，可能刚开始接触WB的小白们也能会遇到，借此分享一下，有不对的地方请WB前辈指教。 1. 洗板：大多数都是经费紧张闲杂物品能不买就不买的对吧，所以玻璃板大家都是怎么晾干的呢。专门的晾干架我们肯定是不会买的，因为有师姐传承下来的神器，随意增减空位，不够可以无限量自制。相信大家一看图就明白怎么做…

做了两年半的Western blot，真的是遇到了太多不可思议的、解决不了的问题，犹记得刚进实验室的时候，学会了WB像是学会了全世界，殊不知这只是科研实验的一块小砖头，如今快要毕业了，还在每天跑着WB补实验。今天在这里跟大家分享一些做WB 的小窍门，能让你节省时间，跑出完好看的条带。   一、蛋白提取 1、不管你提取的是组织蛋白还是细胞蛋白，RIPA裂解液和PMSF都是必不可少的使用试剂。常规情况…

  1、单克隆抗体 vs 多克隆抗体 单克隆或多克隆抗体都可用于ChIP。由于单克隆抗体识别靶蛋白上的单一表位，因此它们通常提供高水平的特异性，低非特异性结合和低背景信号。此外，由于克隆性质的低变异性，单克隆抗体通常在批次之间更一致。   然而，如果由于存在其它染色质相关蛋白，可能导致被单克隆识别的表位是不可接近的或需要识别的表位被ChIP方案中的步骤掩蔽（例如交联），则单克隆…

细胞培养板作为培养细胞的一种常用和重要的工具，其形状、规格、用途多样。你是否也为如何选择适合的培养板而迷茫？你是否正为如何方便、正确的使用培养板而苦恼？你对如何处理培养板是否也有困惑？对不同的培养板各有什么妙用你又有何体会？   细胞培养板的选择 1）细胞培养板依底部形状的不同可分为平底和圆底（U型和V型） 2）培养孔的孔数有6、12、24、48、96、384、1536孔 3）根据材质的不同有Te…

HEPES（4-羟乙基哌嗪乙磺酸）是一种氢离子缓冲剂，pH值缓冲范围：6.8-8.2。我们在细胞培养过程中，经常少不了HEPES缓冲液。它是一种弱酸，在开放式的培养条件中，若加入HEPES，可防止培养基内pH氧化升高，从而将PH维持在7.0左右。HEPES缓冲液的使用终浓度为10-50mmol/L，对细胞无毒性作用。一般情况下，浓度为20mmol/L的HEPES即可达到缓冲能力。既然我们常用于细胞…

1）切记，细胞培养基的储存条件是2-8℃。如果细胞培养基不小心被冻，您应该融化培养基并观察是否有沉淀产生。如果没有沉淀产生，培养基可以正常使用，如果出现沉淀，只能丢弃这些培养基。 2）贮存在冰箱中的瓶口已开的培养基，可能在放置几天后颜色变紫。这主要是由于在暴露到周围的CO2水平时，碳酸氢钠导致了pH值的上升。您可以在使用前松开瓶口，在CO2培养箱孵育培养基10-15min，来校正溶液的pH值(确定…

组织培养：习惯上泛指所有的体外培养。根据培养物的不同可概括为三个不同概念：细胞培养、组织培养和器官培养。 A、细胞培养(cell culture)：将组织块用机械方法或酶解法分离成单个细胞，做成细胞悬液，再培养于固体基质上，成单层细胞生长，或在培养液中呈悬浮状态培养的技术。 B、组织培养(tissue culture)：将活体的一小片组织放在盛有培养液的玻璃或塑料培养器皿中，待组织块粘着后，沿底面…