尹世刚

PCR技术概论 聚合酶链反应(Polymerase Chain Reaction ,PCR)是80年代中期发展起来的体外核酸扩增技术。它具有特异、敏感、产率高、快速、简便、重复性好、易自动化等突出优点；能在一个试管内将所要研究的目的基因或某一DNA片段于数小时内扩增至十万乃至百万倍,使肉眼能直接观察和判断；可从一根毛发、一滴血、甚至一个细胞中扩增出足量的DNA供分析研究和检测鉴定。过去几天几星期才…

对照的目的是对检测的各个环节进行监控，因此我们按照检测的流程对对照进行梳理。常规荧光定量PCR的流程是：样品采集-运输-样品处理-核酸提取-反转录（RNA病毒）-扩增-结果读取。下面看看各个环节都可以使用哪些对照: 1.阳性对照（Positive control，PC）和阴性对照（Negative control，NC） 阳性对照和阴性对照是指在相同的处理条件下，比如一份已知的感染样品和一份已知的…

做完转录组分析之后，一般都要求做qRT-PCR来验证二代测序得到的转录本的表达是否可靠。荧光定量PCR是一种相对表达定量的方法，他的计算方法有很多，常用的相对定量数据分析方法有双标曲线法，ΔCt法，2^-ΔΔCt法(Livak法)，用参照基因的ΔCt法和Pfaffl法。这里主要讲解常用的2^-ΔΔCt法(Livak法)如何计算； qRT-PCR原理 以基因的cDNA为模板进行PCR扩增，在PCR扩…

众所周知，目前主流的实时荧光定量PCR （Quantitative Real-time PCR）方法分为染料法和探针法，染料法以SYBR Green法为代表，SYBR Green染料游离时荧光微弱，但但一旦与双链DNA结合后，荧光大大增强，反应管中的荧光强度与反应管中双链DNA的数量成正比例关系，因此可以通过检测荧光计算反应管中产生的双链DNA（PCR产物）的量，但该方法没有特异性，非特异性扩增的…

雅培（Abbott）推出的新冠肺炎快速检测“神器”ID NOW 号称可以在5分钟内测试出阳性病例，13分钟内反馈出阴性结果。该神器一经推出就轰动全球，美国总统特朗普和FDA局长“直播带货”。但是近日，纽约大学在预印本上的一项的研究显示，ID NOW采用“干棉签法”测试，假阴性比例更高达48%。即便研究人员换用更精确的鼻咽拭子进行检测，漏检率也达到1/3。       …

近年来,随着精准医疗的不断发展，结直肠癌(colorectal cancer,CRC)与二代测序（Next-generation sequencing,NGS）的组合不再陌生。CRC是人类最常见的恶性肿瘤之一。针对表皮生长因子受体的靶向治疗（如西妥昔单抗的应用），在晚期CRC治疗的临床实践中已取得了良好的效果。然而，其疗效除受大家已经熟知的KRAS、NRAS、BRAF和PIK3CA等EGFR下游基…

我做 western 的时候，发现目前的资料都很老，网上的资料也大多互相传抄，说法各异，于是综合了目前网上所能找到的资料和个人实际经验，编辑了这份 western blot 操作步骤，内容包括主要操作步骤和所需要注意的有用的细节，并附上参考文献。 我按下文的步骤操作已经做出来了稳定可重复的、背景干净的 western 条带了，所以相信你也行。为了节省时间，我总结了一下 western blot Q…

什么是PCR？ 聚合酶链式反应（Polymerase chain reaction，PCR）是一种分子生物学技术，用于体外扩增特定的DNA片段。 PCR技术发展简史 PCR之父 Kary Mullis PCR反应基本原理和反应过程 基本原理： 反应过程： 变性——将被复制的DNA片段在高于其Tm的条件下（94~95℃）加热，使DNA双螺旋结构的氢键断裂二解螺旋，形成两条单链分子作为扩增反应的模板，…

PCR简介 聚合酶链式反应（Polymerase Chain Reaction，PCR）技术是基因扩增技术的一次重大革新，是分子生物学发展史中的一个重要里程碑。自20世纪80年代初发展以来，因其具有敏感度高、特异性强、快速简便等特点，在分子生物学、医学、遗传学、法医学、微生物学、食品检验、卫生检验等众多领域中具有巨大的应用价值和广阔的发展前景。 PCR 技术发展史简图 二、PCR反应前注意事项 1…