尹世刚

细胞培养，看似简单的一个实验，却不知道把多少英雄豪杰折磨的意欲“自挂东南枝”~今天科研小助手就为大家盘点一下细胞复苏、传代到冻存的一些步骤和注意事项，希望广大科研汪能与细胞愉快的玩耍！ 细胞复苏 细胞复苏的原则－快速融化：必须将冻存在-196℃液氮中的细胞快速融化至37℃，使细胞外冻存时的冰晶迅速融化，避免冰晶缓慢融化时进入细胞形成再结晶，对细胞造成损害。 image 具体操作： 一. 实验前准备…

长期以来，人们认为中枢神经系统成熟的神经元很难或不能在进行分裂和增殖，属于终末分化细胞。因而中枢神经系统的损伤、变性导致的神经元丢失及缺损难以修复，神经功能的重建被视为几乎不可能。神经干细胞在体外分离培养和增殖的成功，为中枢神经系统再生和功能重建提供了新的可能途径。 “养细胞难、养原代细胞更难、养原代神经干细胞难上加难！” 今天，东澳金牌实验员为大家详细讲解原代神经干细胞取材及培养的那些事，手把手…

细胞培养过程中如果操作不当或者条件控制不合适见容易受到化学或者生物因素的污染，常见的污染源有： 一、细菌污染 细菌污染是实验室细胞培养中常见的污染，即使在细胞培养液中加入了抗菌素，也可能因为操作不慎而引起污染。最常见的有革兰氏阳性菌，如枯草杆菌以及大肠杆菌、假单胞菌等革兰氏阴性菌，其中又以白色葡萄球菌较常见。 培养细胞受细菌污染后，会出现培养液变混浊，pH改变。污染后细胞发生病理改变，胞内颗粒增多…

实时荧光定量PCR（qPCR）通过仪器实时检测反应体系中的荧光值变化，能够准确体现出模板中相应基因的相对表达量变化，成为生命科学领域一项非常重要且常规的技术。这项技术不仅能够检测不同样本中相应的基因表达量，并且被广泛应用于临床疾病诊断、食品安全及动物疾病检测等等行业。 qPCR与常规PCR的共同点及区别 共同点：只要是PCR，就都涉及到DNA聚合酶的扩增以及温度循环过程，因此，常规PCR所含有的体…

关于PCR实验有哪些影响因素呢？我们一般想到的可能是获取的DNA/RNA质量、反转录的效率、引物的特异性乃至DNA聚合酶的保真度、扩增长度等问题，但很少有人会想到耗材的选择，可能也会影响您的实验结果。  银杏（学名：Ginkgo biloba L.）为银杏科、银杏属落叶乔木。因其已存在数万年之久，也被称为生物界的“活化石”。 关于其基因组的测序和信息分析，早在两年前就由华大基因、浙江大学…

逆转录反应，作为分子生物学研究的基本技术之一，已经广泛应用到多个研究领域，可以说是科研人员进行RNA功能研究的看家本事。 众所周知，逆转录的应用领域有以下6种： 逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR） 定量RT-PCR（RT-qPCR） cDNA克隆和文库构建 cDNA末端快速扩增（RACE） 基因表达芯片 RNA测序（RNA-Seq） 今天，小编就整理了一些贴士，帮助大家在面对6种不同的应用时，如…

   一. RT-qPCR 基本原理和概念 实时荧光定量PCR （Quantitative Real-time PCR）是一种在DNA扩增反应中，以荧光化学物质测每次聚合酶链式反应（PCR）循环后产物总量的方法。通过内参或者外参法对待测样品中的特定DNA序列进行定量分析的方法。 以 cDNA 为模板进行 PCR，在 PCR 扩增过程中，通过收集荧光信号，对 PCR进程进行实时检…

实时荧光定量PCR原理 所谓实时荧光定量PCR技术，是指在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程，最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。 1. Ct 值的定义 在荧光定量PCR技术中，有一个很重要的概念 -- Ct值。C代表Cycle，t代表threshold，Ct值的含义是：每个反应管内的荧光信号到达设定的域值时所经历的循环数。 2. 荧光域值（thresh…

    引物     引物与模板配对的长度应至少为17个核苷酸，最高不宜超过30个核苷酸，最佳长度为20-24个核苷酸，如需插入酶切位点，应在酶切位点5＇端多加几个碱基，有利于酶切。引物的（G+C）%含量组成应均匀，尽量避免含有相同的碱基多聚体；两个引物中（G+C）%含量应尽量相似；引物内部应避免形成明显的二级结构，如发夹结构；两个引物之间不应发生互补；特别…

基本概念 1）基因工程（genetic engineering）、基因克隆、DNA重组、DNA克隆、分子克隆。 2）克隆（clone）：无性繁殖——应用酶学的方法，在体外将目的基因与载体DNA结合成具有自我复制能力的DNA分子（重组子），再通过转化或转染宿主细胞、筛选出含有目的基因转化子，进行扩增、提取获得大量同一DNA，或其表达产物。 基因克隆的基本步骤 1）连接外源基因和克隆载体，构建重组DN…