蛋白免疫印迹
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Biacore检测蛋白与小分子相互作用的常见问题（上）
不管是在药物研发还是基础科研中，检测蛋白与小分子的相互作用都是一类重要的实验。小分子最主要的特点是分子量较小，一般在1000 Da以下；并且结构性质各异，部分溶解度较差，需要使用有机溶剂（例如DMSO等）促溶；这些特点给相互作用的检测带来很大的挑战。基于SPR（表面等离子体共振）原理的Biacore系统具有灵敏度高、可进行溶剂校正等优势，不仅可以检测较低的信号，且对分子量差异悬殊的互作类型也能精确…
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如何选择合适的蛋白免疫印迹(WB)转印膜
NC膜、PVDF膜的选择 western blot 中膜的选择是实验成功的关键点，Western blot实验中一般可以选择硝酸纤维素膜(NC) 和PVDF膜，那NC膜和PVDF膜有什么区别呢？怎样才能选择最恰当的杂交膜进行Western blot实验呢？ NC膜 PVDF膜 尼龙膜的特点 解答：尼龙膜是较理想的核酸固相支持物，有多种类型;硝酸纤维素膜(NC膜)是目前应用最广的一种固相支持物，价格…
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细胞样本裂解方案
Elisa（酶联免疫吸附测定）是一种敏感性高，特异性强，重复性好的实验方法。由于其试剂稳定、易保存，操作简便，结果判断较客观等因素，已广泛应用在免疫学检验的各领域中。样本的处理对实验来说比较重要，那么我们今天来探讨一下细胞样本是如何处理的。 01 贴壁细胞裂解方法 单层贴壁细胞总蛋白的提取： 1 倒掉培养液。 2 每瓶细胞加5ml 4℃预冷的PBS（0.01M pH7.2～7.3）。平放轻轻摇动1…
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经验交流：细胞蛋白裂解、提取、定量
细胞蛋白是指的不是在细胞膜上就是在细胞里面，包括细胞质蛋白和细胞核蛋白，还会涉及胞浆蛋白和胞核蛋白的提取，所以我们提取蛋白的第一步是瓦解细胞膜，让蛋白释放出来，第二步才是提取蛋白，提取蛋白就包括是总蛋白还是核蛋白，第三步就是蛋白定量。 第一步是裂解细胞，目前细胞裂解细胞有反复冻融法、超声波处理法、裂解液处理法等。由于反复冻融法、超声波处理法在一定程度上会影响到细胞蛋白的完整性，所以目前用的最多的是…
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当我们在用磷酸化抗体做WB时，应该注意什么？
“我的WB又没有杂出来，太桑心了” “哇靠你的WB又没有杂出来，用掉多少抗体了，还买进口的！” “哇靠你的WB又没有杂出来，却一直一轮又一轮的占用着蛋白电泳仪，我等到黄花都谢了！” 麦子说，这些声音贯穿了她整个研究生生涯，WB，虐了她无数遍，然而凤凰涅盘然后浴火重生，她从WB中参悟到了正确应对失败的人生道理。而在正确应对失败的同时，我们也要学会如何避免失败。小鱼今天给大家分享一下在用磷酸化抗体做W…
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磷酸化抗体使用建议，听听CST专家怎么说？
1.确定样本中磷酸化蛋白的表达量 对的样本，正确的处理方法和合适的阳性对照是实验成功的第一步。 对的样本：实验前需先查阅文献或通过预实验检测该样本是否表达，若该样本根本就不表达目的蛋白，那就不要浪费感情了吧； 正确的处理方法：若正常情况下样本的磷酸化水平过低或不表达，可通过物理或化学方法进行一定的刺激和诱导，刺激条件各不相同。但这并不代表刺激越多越好，充分但不过分（如磷酸化IRS1，仅需刺激5mi…
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一抗怎么选？需要考虑的都在这里
abcam是世界上最大的高品质抗体供应商之一，成立于1998年，总部位于英国的剑桥科学园，专门生产和分销研究型抗体，已有差不多十余万种抗体和试剂，并以每月上百种新产品的速度不断增加。在2012年，abcam 并购了美国的 Epitomics 公司，成为一家有领导地位的 RabMAbs® 供应商。 当搜索abcam网站，您会发现对于任何一种给定的目标抗原，都有不止一种有效抗体。如何筛选…
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Western blot窍门分享
做了两年半的Western blot，真的是遇到了太多不可思议的、解决不了的问题，犹记得刚进实验室的时候，学会了WB像是学会了全世界，殊不知这只是科研实验的一块小砖头，如今快要毕业了，还在每天跑着WB补实验。今天在这里跟大家分享一些做WB 的小窍门，能让你节省时间，跑出完好看的条带。 一、蛋白提取 1、不管你提取的是组织蛋白还是细胞蛋白，RIPA裂解液和PMSF都是必不可少的使用试剂。常规情况…
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新手小白做Western blot最需要注意的小细节
上次跟大家分享了一个做WB的小技巧如何做出简简单单的WB背景？今天我们来接着分享。 刚开始做WB遇到很多问题，可能刚开始接触WB的小白们也能会遇到，借此分享一下，有不对的地方请WB前辈指教。 1. 洗板：大多数都是经费紧张闲杂物品能不买就不买的对吧，所以玻璃板大家都是怎么晾干的呢。专门的晾干架我们肯定是不会买的，因为有师姐传承下来的神器，随意增减空位，不够可以无限量自制。相信大家一看图就明白怎么做…
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Western Blot最全攻略：从protocol到问题解决
蛋白免疫印迹（western blotting）一般由凝胶电泳、样品的印迹和免疫学检测3个部分组成，是根据抗原抗体特异性结合检测样本中某种蛋白的方法，与ELISA不同的地方在于WB是一种半定量的检测方法。操作流程如下： 下面详细介绍一下每个操作步骤： 一、样本的制备 （1）样本一般是组织和细胞，根据样本类型的不同，选择合适的裂解液： 样本类型 裂解液 全细胞 NP-40、RIPA 细胞质（…
