尹世刚

培养基 培养基是培养环境中最重要的组成部分，因为它为细胞生长提供了必要的营养、生长因子和激素，并调节培养物的pH值和渗透压。 尽管最初的细胞培养实验使用从组织提取物和体液中获得的天然培养基进行，但对标准化和培养基质量的需求不断增长，促进了化学成分确定的培养基的发展。培养基的三个基本类别分别是基础培养基、减血清培养基和无血清培养基，三种培养基对血清添加的要求有所不同。 基础培养基 大多数细胞系在含有…

细胞培养的一大优势在于能够控制细胞繁殖的物理化学环境（即温度、pH值、渗透压、O2和CO2 张力）和生理环境（即激素和营养浓度）。除温度外，培养环境由生长培养基控制。虽然细胞培养的生理环境不如其物理化学环境明确，但是通过更好地了解血清成分、确定增殖所需的生长因子以及更好地了解培养过程中的细胞微环境（即细胞间相互作用、气体扩散、细胞-基质相互作用），现在可以采用无血清培养基进行一些细胞系的培养。贴壁…

选择合适的细胞系 为自己的实验选择合适的细胞系时，请注意以下标准： • 种属：非人类和非灵长类动物细胞系的生物安全限制通常较少，但是否需要使用种属特异性的细胞培养物，则由所要开展的实验来最终决定。 • 功能特征：实验的目的是什么？例如，肝脏和肾脏来源的细胞系可能更适合用于毒性检测。 • 有限细胞系或连续细胞系：虽然选择有限细胞系会使您在表达正常功能方面具有更多的选择，但是连续细胞系往往更容易扩增和…

PH值 大多数正常的哺乳动物细胞系都能在pH值为7.4的环境中生长良好，而且不同细胞 株间差异极小。但是，目前发现有些转化细胞系在轻度偏酸性的环境（pH 7.0-7.4）中生长较好，而有些正常的成纤维细胞系更适合在轻度偏碱性的环境（pH7.4-7.7）中生长。Sf9和Sf21等昆虫细胞系在pH值为6.2的环境中生长情况最佳。 CO2 生长培养基可控制培养物的pH值，为培养细胞pH值的变化提供缓冲作…

细胞培养塑料表面 多年来，许多不同类型的塑料已用于细胞培养和基于细胞的检测。包括聚对苯二甲酸乙二醇酯（PET）、高密度和低密度聚乙烯（PE）、聚氯乙烯（PVC）和聚丙烯 （PP），但目前实验室中最常用的塑料是聚苯乙烯（PS）。PS的低成本及其惰性化学性质使其成为一次性培养表面的最佳选择。在其纯粹形式下，PS是疏水性的，这非常适合悬浮细胞培养。但是，除造血细胞系和其他一些细胞外，大多数脊椎动物细胞均…

在细胞培养过程中会出现这样或那样的问题，这些问题从细胞生长角度来说，针对细胞不贴壁、生长缓慢、生长不好，甚至死亡的原因，我们做以下分析并提出相对应的解决方法。 一、培养细胞不贴壁 可能原因： ●胰蛋白酶消化过度 ； ●支原体污染 ； ●培养基pH值过碱（NaHCO3分解）； ●细胞老化 ； ●接种细胞起始浓度太低或太高 。 解决方法：  ●缩短胰蛋白酶消化时间或降低胰蛋白酶浓度； ●分离培养物，检…

流式细胞仪检测分析的对象是细胞或者细胞样颗粒性物质，所以流式细胞术是细胞学的重要研究手段之一。而如何准备合格的样品是包装实验数据准确的基础，下面就讲一下如何制备流式样品。 独立细胞样品制备 如果研究对象是体外培养的悬浮细胞，则直接收集细胞于离心管中，离心沉淀细胞，然后用PBS重悬沉淀，取适量细胞于离心管中，标记相应的荧光素偶联抗体，最后洗去未结合的抗体，用流式PBS重悬细胞于流式管中，则可上样分析…

Elisa（酶联免疫吸附测定）是一种敏感性高，特异性强，重复性好的实验方法。由于其试剂稳定、易保存，操作简便，结果判断较客观等因素，已广泛应用在免疫学检验的各领域中。样本的处理对实验来说比较重要，那么我们今天来探讨一下细胞样本是如何处理的。 01 贴壁细胞裂解方法 单层贴壁细胞总蛋白的提取： 1 倒掉培养液。 2 每瓶细胞加5ml 4℃预冷的PBS（0.01M pH7.2～7.3）。平放轻轻摇动1…

细胞蛋白是指的不是在细胞膜上就是在细胞里面，包括细胞质蛋白和细胞核蛋白，还会涉及胞浆蛋白和胞核蛋白的提取，所以我们提取蛋白的第一步是瓦解细胞膜，让蛋白释放出来，第二步才是提取蛋白，提取蛋白就包括是总蛋白还是核蛋白，第三步就是蛋白定量。 第一步是裂解细胞，目前细胞裂解细胞有反复冻融法、超声波处理法、裂解液处理法等。由于反复冻融法、超声波处理法在一定程度上会影响到细胞蛋白的完整性，所以目前用的最多的是…

免疫组织化学（简称免疫组化）是组织化学的一种，它是利用已知的特异性抗体或抗原能特异性结合的特点，通过化学反应使标记于结合后的特异性抗体上的显示剂，如酶、金属离子、同位素等，显示一定的颜色，并借助显微镜观察其颜色的变化，从而在抗原抗体结合部位确定组织、细胞结构的化学成份或化学性质。 实验过程包括切片制作（固定，脱水，透明，包埋，切片，贴片，烤片），脱蜡，水化，阻断，抗原修复，封闭，一抗孵育，二抗孵育…