细胞消化实验
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细胞生物学 整体解决方案
是否遇到贴壁细胞难以消化的时候？是否遇到要么细胞成片脱落，要么细胞难以脱落的情况？到底是实验中哪一步偏离了操作规范呢？
细胞消化实验是细胞培养中的关键步骤，其主要目的是将贴壁细胞从培养器皿（如培养瓶、培养皿）中温和解离，使其重新悬浮，以便进行后续的传代、扩增、冻存或实验操作。
许多下游实验依赖消化后的细胞悬液，例如：
流式细胞术：需单细胞通过检测通道。
转染/感染：分散细胞提高载体导入效率。
类器官/3D培养：需先解离为单细胞再重聚集。
实验准备
细胞实验的试剂耗材准备中，需要多种试剂配合完成功能，因此各试剂的适配性也是影响实验结果的重要因素。
- 细胞培养液
基础培养基 + 10% FBS
其中，基础培养基类型需要根据细胞类型选择
用于终止消化反应
新鲜培养基用于重悬细胞并继续培养 - PBS缓冲液
无钙镁PBS（pH 7.4）
冲洗残留血清，避免抑制胰酶 ，需预温至37°C - 细胞消化液
0.25%胰蛋白酶-EDTA/SPccutase
其中，基础培养基类型需要根据细胞类型选择
实验步骤
常见问题解答
1.消化时间优化
常规细胞系 1~2分钟。
（如HEK293）原代/干细胞 0.05%胰酶或胶原酶
延长至5~10分钟。上皮细胞 需冷消化（4°C）预处理。
（如MDCK）2.常见问题
细胞成团 吹打不充分或消化不足
存活率低 消化过度或离心过快
贴壁延迟 胰酶残留3.特殊细胞处理
悬浮细胞 直接离心换液，无需消化。
类器官 需先用SPccutase解离为单细胞
细胞消化实验的标准化操作直接影响细胞状态和下游实验结果。关键控制点包括：
胰酶浓度与时间匹配细胞类型。
轻柔吹打避免机械损伤。
及时终止防止过度消化。
建议首次使用新细胞系时进行预实验优化参数！
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