尹世刚
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pH与肿瘤侵袭
肿瘤细胞的主动运动是肿瘤进行转移的重要过程。肿瘤细胞在原发性肿瘤中迁移进入血管系统(侵袭和转移),但也需要主动成形以在新的宿主组织中离开血管内空间(外渗)。研究表明,肿瘤(和正常组织)细胞的定向或随机定向运动受pH调节影响。许多研究表明,如果细胞在中等酸性的pH(≈6.7)下培养,肿瘤细胞迁移增加。 那么,这种现象是通过什么实验观察到的呢 time-lapse microscopy transwe…
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Transwell实验---从入门了解到SCI写作
Transwell检测细胞迁移步骤 1. 饥饿处理细胞 2. 铺胶:将基质胶适当稀释,铺在上层小室中,聚合过夜。 3. 铺下室培养基:含20%FBS的培养基。 4. 制备细胞悬液:胰酶消化细胞,制备细胞悬液。 5. 铺细胞:将上层小室放入孔板中,细胞计数后将细胞铺在上层小室中。 6. 继续培养:细胞培养箱中培养,通常24或48h。 7. 擦去上层细胞:用棉签擦去上层小室中的细胞和基质胶。 8. 固…
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transwell小室跨孔侵袭实验经验总结
1.给予细胞瞬时转染。24h后,PBS洗涤两次,消化,离心,去除培基,加入无血清的空培,重悬,计数。 2.8um孔径聚碳酸脂微孔滤膜的Boyden小室预先涂抹好50ul 1:40 RPMI-1640稀释的人工基质Matrigel胶,此操作应全程在冰上进行,因基质胶于室温下容易凝固。 3.预处理好的Boyden小室应置于37℃孵箱中凝固2h,使用前紫外线照射2h杀菌并加入适量无血清培养基,置于孵箱内…
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细胞侵袭实验总结
实验原理 将细胞小室(Transwell小室)放入培养板中,小室内称上室,培养板内称下室,上室内盛装上层培养液,下室内盛装下层培养液,上下层培养液以聚碳酸酯膜相隔。我们将细胞种在上室内,由于聚碳酸酯膜有通透性,下层培养液中的成分可以影响到上室内的细胞,从而可以研究下层培养液中的成分对细胞生长、运动等的影响。 细胞小室(transwell) 应用不同孔径和经过不同处理的聚碳酸酯膜,就可以进行共培养、…
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Transwell迁移/侵袭实验
基本原理 将Transwell小室放入培养板中,小室内称上室,培养板内称下室,上室内盛装上层培养液,下室内盛装下层培养液,上下层培养液以聚碳酸酯膜相隔。我们将细胞种在上室内,由于聚碳酸酯膜有通透性,下层培养液中的成分可以影响到上室内的细胞,从而可以研究下层培养液中的成分对细胞生长、运动等的影响。 应用不同孔径和经过不同处理的聚碳酸酯膜,就可以进行共培养、细胞趋化、细胞迁移、细胞侵袭等多种方面的研究…
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Nature | 破解领域难题:BRCA1是如何被招募到DNA双链断裂位点?
撰文 | 胡小话责编 | 兮 同源末端重组 (HR) 和非同源末端重组 (NHEJ) 是细胞遭受DNA双链断裂 (DSBs) 之后进行损伤修复的两个重要武器,并分别由各自通路中的关键蛋白BRCA1 (HR) 和53BP1 (NHEJ) 所介导。它们的相同之处在于,BRCA1和53BP1都需要同时结合在H2AK15ub (由泛素E3连接酶RNF168催化) 和H4K20这两个位点而被招募到损伤位点;…
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Sci Adv | 周钢桥/贺福初合作揭示新的肝癌癌基因RRS1
责编 | 酶美 我国是肝癌(Hepatocellular cancer, HCC)高发国家,每年新发病例约50万,约占全球肝癌新发病例的半数以上。近年来生物医学和技术的发展显著促进了肝癌的防诊治水平,但肝癌患者的总体生存率和预后仍不理想。机体生命周期内基因组变异的持续累积是肝癌发生发展的重要原因。其中,体细胞的拷贝数变异(Copy number alteration, CNA)是基因组变异的一种重…
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Cell | 突破IL-12治疗瓶颈,独特结构带来肿瘤免疫治疗新策略
撰文 | 春晓 责编 | Qi 细胞因子信号传导的一个关键特征是利用共享信号受体(shared signaling receptors)作为多种细胞因子的共同信号转导亚基,这也是调节生理学多效性的普遍机制之一,细胞因子通过细胞表面受体的多聚化和JAK-STAT信号通路来调控【1】。白介素-12(IL-12)是第一个被鉴定的异二聚体细胞因子,然而,毒性一直是IL-12临床应用的主要限制因素【2, 3…
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手把手教会荧光共定位分析
ImageJ(https://imagej.nih.gov/ij/ )是美国NIH基于Java开发的**图像处理软件。今天的主题是共定位分析,那么什么是共定位(Colocalization)?从物理角度来看,它意味着两种或多种颜色荧光分子发出的颜色占据图像中的相同像素。在生物学上,共定位是指两个或多个不同分子位于细胞中的同一结构。 在数字成像的背景下,它可以被描述为多通道图像中的两种或更多荧光染料…
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ImageJ实用技巧——不规则细胞分割&计数(解放双手篇)
在之前的教程中,介绍了怎么对细胞核进行自动细胞计数:传送门 细胞核之间的重叠部分,可以利用Watershed进行打断。 但这种方法只适用于较规则的椭圆形,例如细胞核等。 如果遇到不规则的细胞,例如下图的细胞,如果想要对细胞之间进行分割,并测得细胞面积和数量,之前的方法就不再适应了。 荧光显微镜下的成纤维细胞 这篇文章会介绍一种对不规则细胞进行分割以及计数的方法。将单个细胞分割之后,可以测量单个细胞…