1.产品描述：
NSCGROExpansionMediumPro是一种无血清培养基，用于在贴壁或悬浮培养中生长和扩增的神经干细胞
(NSC)。使用NSCGROExpansionMediumPro，NSC可以扩增多次传代，同时保持其分化为神经元和胶质细胞的
潜力。使用NSCGROExpansionMediumPro，NSC可以扩增多次传代，同时保持其分化为神经元和胶质细胞的潜
力。本产品中已包含神经干细胞生长所需的各种成分，按推荐比例添加后无需添加任何成分，可直接用于神经干
细胞的体外培养。
2.产品参数：
3.使用方法：
1、准备完全培养基：
按照配置比例，将SF27（不含VA，50×）和神经干细胞专用添加剂加入神经干细胞专用基础培养基中，可按需
求添加双抗溶液。完全培养基置于4℃保存，有效期3个月。
2、培养瓶的前处理：
(1)接种前，请先选择一种覆盖层材料覆盖培养瓶，推荐SPERIKON的基质胶产品，使用按1:100稀释后处
理培养瓶。以T25为例，每瓶5mL，确保表面完全覆盖，并在含5%CO2的37°C潮湿环境中孵育60分钟。
(2)在使用前，立即去除所有覆盖层溶液，然后用预热的完全培养基替换，注意需尽量避免刮擦培养表面。
3、NSC细胞的复苏：
（1）在37°C水浴中迅速(<2分钟)解冻细胞。
（2）用移液管将冻存液全部移入无菌的15mL离心管中。
（3）小心滴加(每秒1滴)，加入4mL预热好完全培养基，然后轻轻旋转离心管混合。
（4）继续添加预热的完全培养基至10mL。
（5）200g离心4分钟，确认细胞沉淀，丢弃上清。
（6）加入5mL预热好的完全培养基重悬细胞沉淀，然后添加ROCK抑制剂Y-27632（终浓度10μM），再将
离心管的全部内容物转移到包被的组织培养瓶中。建议以大于1*105个细胞/cm2的密度接种细胞。
（7）于37°C，5%CO2的潮湿环境中孵育。
（8）复苏后24小时用新的预热的完全培养基替换培养基。
4、NSC细胞的传代：
（1）当细胞密度达到90-100%的融合度时，丢弃培养瓶中的培养基。
（2）用5mL不含钙和镁的预温DPBS洗涤细胞，然后吸弃溶液。
（3）在每个培养瓶中加入1.0mL预热的细胞解离试剂，然后在室温下孵育2-5分钟。在孵育前确保完全覆
盖细胞。用倒置显微镜观察细胞是否脱离。如有必要，轻拍培养瓶以促进细胞脱离。
（4）轻轻上下移液，使团块分散到单个细胞悬液中。加入9mL预热好的完全培养基停止细胞解离反应，然
后将细胞悬液转移到无菌离心管中，200g离心4分钟。
（5）丢弃上清，然后用适量完全培养基重悬细胞沉淀。并用细胞计数器测定总活细胞密度
（6）从覆盖层培养瓶中除去覆盖层溶液，然后加入5mL预热的全培养基，添加Y27632（终浓度10μM）。
（7）在每个培养瓶中加入5*104细胞/cm2（每个T-25培养瓶接种1.25*106个细胞），然后混合细胞悬液以
确保细胞均匀分布。
（8）于37°C，5%CO2的潮湿环境中孵育。建议每2-3天更换一次完全培养基。
5、NSC细胞的冻存：
（1）使用完全培养基和20%二甲基亚砜(DMSO)制备细胞冻存液。
（2）按照“NSC传代”中的步骤1至步骤5收集细胞以便进行冷冻保存。
（3）通过细胞计数数据，计算细胞密度为2*106个活细胞/mL所需的最终体积。
（4）丢弃上清，然后用计算体积的完全培养基重悬细胞。
（5）加入等量的20%DMSO冻存液，使终浓度为10%DMSO。
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（6）立即将细胞悬液等分放入冻存瓶中(1mL/瓶)。
（7）通过程序降温实现低温保存，将冷冻细胞转移到液氮中。
（8）建议直接使用SPERIKON的无血清冻存液效果更好，操作更简便。
4.注意事项：
1.使用产品时应注意无菌操作，避免污染；
2.SF27（不含VA，50×）、神经干细胞专用添加剂和双抗请按标签所示温度保存，在2-8℃溶解后使用，若用
量较少，请在第一次解冻后按使用比例进行分装，避免反复冻融；
3.本产品为单独成分的包装形式，需自行配制成完培后再进行使用，完培有效期为3个月；
4.为保持本产品的最佳使用效果，不宜将其长时间放置于室温或较高的温度环境中；
5.所有产品请于保质期内使用，超出保质期，必须放弃使用；
6.本产品只供进一步科研使用，不可应用于临床等其他方面。
免责声明：仅供科研使用，本公司将不为任何不正常使用此产品时所发生的意外负责。
