荧光光谱分析仪 (Spectra Viewer Pro)
多色流式/显微镜方案设计与光谱匹配分析
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选择染料 (Fluorophores)
请添加染料以开始分析...
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激光配置 (Lasers)
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滤光片 (Filters)
分析报告 (Analysis)
选择染料和滤光片查看信号匹配度...
* 曲线基于高斯分布模拟 (Gaussian Simulation)。
Ex Eff = 激发效率 (Excitation Efficiency at Primary Laser)。
使用指南与实验设计技巧
如何利用 Spectra Viewer Pro 优化您的多色流式/显微镜方案？
选择染料 (Fluorophores)
在 "Step 1" 下拉菜单中搜索并添加您的实验染料（如 FITC, PE, APC）。
- Ex 激发谱：虚线表示，展示染料被激光激发的潜力。
- Em 发射谱：实线填充，展示染料发出的荧光信号分布。
配置光路 (Instrument)
模拟您的流式细胞仪或显微镜配置，查看匹配情况。
- 激光 (Lasers)：勾选您机器配备的激光器（如 488, 561）。系统会自动计算激发效率 (Ex Eff)。
- 滤光片 (Filters)：添加带通滤光片（如 530/30）。背景中会出现灰色矩形，表示信号接收窗口。
分析与优化 (Analysis)
观察 分析报告 (Analysis) 面板，评估方案可行性。
- 信号匹配 (Signal)：绿色进度条越长，表示该通道捕获的信号越强。
- 光谱重叠 (Spillover)：如果一个染料在非目标通道有较强信号，提示需要调节补偿 (Compensation) 或更换染料。
专家技巧 (Pro Tips)
1. 激发效率至关重要
即便发射谱（Em）在滤光片范围内，如果激发效率（Ex Eff）很低（如 <10%），该通道也无法检测到有效信号。例如：PE 用 488nm 激发效率约 70%，但用 561nm 激发可达 100%（更亮）。
2. 避免严重串色 (Spillover)
在多色方案中，尽量选择发射峰间距较大的染料。例如 FITC 和 PE 虽常用，但光谱重叠严重；可尝试用 Alexa 488 搭配 Alexa 594 或 APC 来减少干扰。
3. 串联染料 (Tandem Dyes) 注意事项
如 PE-Cy7 或 APC-Cy7，它们利用 FRET 原理。在 Viewer 中主要关注其受体（Cy7）的发射峰，但不要忽略供体（PE/APC）的残留发射，这常是漏光的主要来源。
