NK细胞培养试剂盒套装

产品详情         

本产品为NK 细胞基础培养基套装（NK Cell Expansion Medium Kit），是专用于NK 细胞激活扩增培养的高效增殖培养基，可搭配斯博利康 NK 细胞基础培养基补料配置为完全培养基使用。

NK 细胞基础培养基+补料配置为NK细胞完全培养基是一款专为 NK 细胞培养而设计的无血清、无异源动物源成分的 NK 细胞维持和扩增培养基。和传统的含血清培养基相比，无血清培养基的设计大大降低在NK 细胞培养过程中引入异源物质的风险，提高培养基批次间的一致性，并且避免血清中的不明确成分可能导致的NK细胞过度激活以及活性降低。

套装组成

 操作指南

包被

细胞活化瓶预处理（第-1 天） 1 支 NK 试剂 A 和 13 mL试剂E 混匀，加入到 175cm² 培养瓶（非 TC 处理）中，平放晃匀铺满，或 1 支 NK 试剂 A-2.0 和 9 mL 试剂E 混匀，加入 75cm² 培养瓶中，平放晃匀铺满，4℃ 冰箱平放过夜。次日种瓶前吸弃包被液。

种瓶

外周血 PBMC 分离与诱导（第 0 天）

1 .分离血浆：取少量血样（约 300μL）划线或滴入平皿进行检菌。室温下离心 15 分钟，取离心上清作为血浆。

2 .血浆灭活：上层血浆 56℃灭活半小时，置于 4℃冰箱半小时，取出在室温下离心 10 分钟，取上清备用。

3.分离 PBMC：等体积的生理盐水与血细胞沉淀混匀，加到 Ficoll 层上使分层保持清晰，室温下离心 25 分钟。

4 .洗涤细胞：吸取 PBMC 层，加生理盐水吹打混匀，室温下离心 5 分钟。再次洗涤细胞。

5 .细胞计数：弃上清，用少量完全培养基重悬细胞，吸取少量细胞计数。调整细胞密度 1-1.5×10⁶个/mL。

6.种瓶： 吸弃包被液，将细胞悬液中加入 NK 试剂 B-2.0，灭活血浆 2.5mL，转入培养瓶内，培养终体积约 25mL。 剩余血浆 4℃密封保存备用。

注意：* 完全培养基的配置：每瓶培养基加入 1 支 试剂F（IL-2） ，终浓度为 1000IU/mL。

*包被瓶从冰箱取出的时间约为细胞加入前的 10min。

培养

第一次补液（第 3 天）

1.显微镜下观察细胞，确定是否可以补液。①瓶底贴壁的克隆团达到瓶底面积的 30%以上。②颜色与初始培养液比偏黄。（如无法判断，可推迟一天补液。）

2 .补液操作。加入 NK 试剂 C-2.0 和 3.5mL 灭活血浆，再加入约 46.5mL 完全培养基，培养终体积为 75mL。注意：* 请勿吹打细胞！！！

第二次补液（第 5 天）

3 .加入 NK 试剂 D-2.0 ，和 8.75mL 灭活血浆，再加入约 166.25mL 完全培养基，培养终体积定容到 250mL。注意：* 请勿吹打细胞！！！

* 第 5 天开始细胞增殖较明显，中大团变多且分裂相形态细胞居多。

装袋 第三次补液（第 7 天）

把剩余血浆加入培养瓶，再将培养瓶中的细胞悬液转入细胞培养袋中，随后补液（约 350mL 完全培养基，也可按密度补液，补液后密度在 0.6~ 1×10 ⁶个/mL 范围内），培养终体积定容到 600mL。

注意：

* 装袋前，轻微拍打培养瓶底部细胞，如克隆团太大可进行吹打，注意吹打的力度避免将克隆团吹成单个细胞。

* 装袋后，需定期对培养袋进行拍打，使细胞团维持在肉眼观察针眼大小即可。

分袋 第四次补液（第 9 天）

①配置另一瓶 NK 完全培养基。②将培养袋中的细胞悬液分出一半加入新的培养袋，随后每袋再补入 300mL 完全培养基。（培养终体积为 1200mL）

第五次补液（第 11/12 天）

将剩余的约 800mL 完全培养基均分到 2 个培养袋中，每袋终体积约 1000mL。

检验（第 13 天）

用 2mL 注射器分别从袋内抽取少量细胞悬液进行细菌、内毒素、支原体检测。

收获 （第 14/15 天）

正常情况下，第 14 、15 天各收获 1000mL 细胞悬液。若因实验需要，可相应提前或延迟收获时间。如需获得更多培养体积，可延长 NK 培养时间（可延长培养至 21 天,需额外采购 NK 无血清培养基及 IL-2），继续补加 NK 完全培养基，补液后密度不低于 1×10 ⁶个/mL。

储存条件

NK细胞基础培养基和补料F 2～8℃，避光；补料A、B、C、D  -20℃，避光；试剂E 常温保存。

运输条件：冰袋和干冰

有效期：见产品外包装