1. 什么是M199培养基?
M199培养基:M199(Medium 199)是一种用于培养哺乳动物细胞的经典培养基,最初设计用于营养研究,特别适合需要复杂营养条件的细胞类型,如内皮细胞、角膜细胞和原代细胞。
2. M199培养基的主要成分是什么?
成分特点:M199包含多种氨基酸、维生素、无机盐、葡萄糖,以及其他生长因子。它还可以根据需要补充血清、酚红和谷氨酰胺等。
配方灵活性:M199有多种配方,可以适应不同的实验需求,如液体形式和粉末形式,含酚红或无酚红等。
3. M199与其他培养基(如DMEM、RPMI 1640)的区别是什么?
营养复杂性:M199比MEM和DMEM含有更多的维生素和氨基酸,适合更复杂的细胞培养需求。相比之下,DMEM适用于广泛的细胞系,而M199更专门化,常用于原代细胞和内皮细胞的培养。
应用范围:M199常用于心血管研究、角膜细胞培养以及某些原代细胞的培养,而DMEM和RPMI 1640则更通用。
4. M199培养基的储存条件是什么?
储存温度:M199应保存在2-8°C的冰箱中,避免反复冻融。
光敏性:如果M199培养基中含有酚红,应避免长时间暴露在光线下,以防止成分降解。
5. M199培养基中是否需要添加血清?
通常需要:大多数细胞培养需要补充胎牛血清(FBS)以提供生长因子和其他必需的营养物质,但具体的血清浓度应根据细胞类型和实验要求进行调整。
6. M199培养基中L-谷氨酰胺的重要性?
L-谷氨酰胺的作用:L-谷氨酰胺是细胞增殖和代谢所需的重要氨基酸,但在培养基中不稳定,可能降解。为了保证M199培养基的稳定性,可以选择添加稳定的谷氨酰胺替代品,如GlutaMAX。
7. 如何应对M199中的pH变化?
CO2环境:确保培养箱内的CO2浓度在5%左右,以维持培养基的pH稳定。
及时更换培养基:如果培养基颜色变黄(表明pH值降低),应及时更换培养基。
8. M199适用于哪些细胞类型?
常见适用细胞:M199广泛用于内皮细胞、角膜细胞、成纤维细胞和其他原代细胞的培养,尤其适合在需要复杂营养条件的细胞类型中使用。
9. 如何处理M199培养基的污染?
避免污染:操作中严格遵守无菌技术,使用无菌过滤器(0.22 µm)过滤培养基,以减少污染风险。
应对措施:如果发现培养基污染,应立即丢弃污染的培养基,重新制备并确保无菌操作环境。
10. M199培养基的常见应用有哪些?
常见应用:M199培养基在组织工程、心血管研究、角膜移植和各种原代细胞培养中应用广泛,特别适合对生长条件较为挑剔的细胞。